摘要
固相萃取儀前期處理步驟
內(nèi)容
固相萃取儀前期處理步驟
選擇SPE 小柱或?yàn)V膜
首先，根據(jù)待測(cè)樣品的性質(zhì)，選擇對(duì)其有較強(qiáng)保留能力的固定相，若待測(cè)樣品帶負(fù)電荷, 可用陰離子交換填料, 反之則用陽離子交換填料。若為中性待測(cè)物, 可用反相填料萃取。SPE 小柱或?yàn)V膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測(cè)物的濃度大小而定。對(duì)于濃度較低的體內(nèi)樣品, 一般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。
活化
萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml 溶劑沖洗濾膜使SPE 填料保持濕潤(rùn), 因?yàn)樘盍细稍飼?huì)降低樣品保留值，而各小柱的干燥程度不一,也會(huì)影響回收率的重現(xiàn)性。先用甲醇等水溶性有機(jī)溶劑沖洗填料, 因?yàn)榧状寄軡?rùn)濕吸附劑表面, 并滲透到非極性的硅膠鍵合相中, 使硅膠更容易被水潤(rùn)濕；然后再加入水或緩沖液沖洗，創(chuàng)造和樣品溶劑相容的環(huán)境并提高回收率。
上樣
一般可采取以下四種方法：
(1) 用0.1mol/L 酸或堿調(diào)節(jié), 使pH<3或pH>9, 離心取上層液萃取；
(2) 用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 以水或緩沖液稀釋后萃取；
(3) 用酸或無機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液, 調(diào)節(jié)pH 值后萃取；
(4) 超聲15min后加入水、緩沖液, 取上清液萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min, 流速快不利于待測(cè)物與固定相結(jié)合。
淋洗
反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液, 可在清洗液中加入少量有機(jī)溶劑、無機(jī)鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個(gè)小柱的容積, 而SPE濾膜為5～10ml。
洗脫
應(yīng)選用5～10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗下待測(cè)物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度, 則可先將洗脫液揮干后, 再用流動(dòng)相重組殘留物后進(jìn)樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水, 可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE 填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測(cè)物,再用極性較強(qiáng)的HPLC 分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測(cè)物可電離, 可調(diào)節(jié)pH 值, 抑制樣品離子化, 以增強(qiáng)待測(cè)物在反相SPE 填料中的保留, 洗脫時(shí)調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫, 收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達(dá)到最佳分離效果。在洗脫過程中應(yīng)減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫, 回收率更高。
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