色譜柱的維護清洗方法

色譜柱的維護清洗方法
 
尺寸排阻色譜柱的清洗方法
 
分子尺寸排阻色譜柱吸附的主要原因
 
用于高分子分子量測定的分子尺寸排阻(SEC)色譜柱有SuperAW系列、α系列、PW·PWXL系列等產品。柱中填充介質與樣品間常會發生：
 
(1)離子性吸附:分子尺寸排阻色譜柱中的樹脂填充介質，由于羧基帶有負電荷(盡管非常少)，樣品中帶有正電荷的組分將會與其發生離子吸附作用。
 
(2)疏水性吸附:分子尺寸排阻色譜柱中的樹脂填充介質，會與一些疏水性較高的樣品(如：具苯環物質)發生疏水吸附作用。
 
硅膠基質的填料，常會與一些難溶性膜蛋白等疏水性物質發生疏水性吸附作用。另外，殘存的硅醇基會與堿性物質間發生離子吸附。對于硅膠基質的填料，雖然不是發生吸附作用，但必須考慮酸性條件下官能團會發生脫落或堿性條件下硅膠基質會發生溶解的情況。
 
分子尺寸排阻色譜柱的清洗方法
 
☆樹脂基質分子尺寸排阻色譜柱的清洗方法
 
1、離子性吸附:對于陽離子性吸附物質，通過提高鹽濃度進行過柱清洗。(1mol/L的醋酸緩沖液)
 
2、疏水性吸附:對于疏水性吸附物質，可通過提高有機溶劑的濃度(PW·PWXL：50%、α及SuperAW：100%可)進行過柱清洗。
 
3、復合吸附:對于陽離子性·疏水性物質的去除，可提高鹽濃度進行過柱，水洗后，提高有機溶劑濃度進行過柱。
 
☆硅膠基質分子尺寸排阻色譜柱的清洗方法
 
1、堿性物質的去除(離子性吸附)；通過提高淋洗液的鹽濃度(通常0.5mol/L)進行過柱清洗。
 
2、疏水性吸附的去除(疏水性吸附)；在淋洗液中添加甲醇、乙腈(10-20%)等水溶性有機溶劑進行過柱清洗。本法請注意緩沖液中鹽的析出。
 
3、在淋洗液中添加尿素、中性界面活性劑；在淋洗液中添加6-8mol/L的尿素或0.2-0.3%的中性界面；活性劑(Triton、Tween、Brij等)后進行過柱清洗。但需注意尿素及界面活性劑的柱中殘留。
 
一般來說，清洗時間可選擇為過柱5-10個柱體積便可。在附吸成分其吸附力極強時，即使進行過清洗，柱性能也有可能得不到恢復。另外，請充分考慮淋洗液的pH值，以避免損壞色譜柱。
 
反相硅膠色譜柱的清洗方法
反相硅膠色譜柱吸附的主要原因
 
反相硅膠柱填充介質(固定相)與樣品間常常會發生下列吸附現象：
 
(1)殘存硅醇基與堿性物質間的離子吸附；
(2)硅膠表面的金屬雜質與金屬配位物質間的吸附；
(3)疏水性極強的物質在柱中的蓄積。以上現象，會引起反相色譜柱柱效下降、拖尾、重復性不良等狀況的發生
 
反相硅膠色譜柱的清洗方法
 
反相硅膠色譜柱的清洗方法——疏水性物質的去除:
 
使用有機溶劑(乙腈、甲醇、乙腈與THF的混合溶劑)進行清洗。
 
考慮樣品成分對于有機溶劑的溶解性，選用比淋洗液濃度高的有機溶劑、或選用極性較低的有機溶劑進行過柱清洗。這種情況下，有必要注意淋洗液中鹽的析出現象。
 
反相硅膠色譜柱的清洗方法——堿性物質(金屬配位物質)的去除:
 
使用酸性水溶液與有機溶劑的混合液(0.1%磷酸、0.1%TFA/乙腈、甲醇的混合液)進行過柱清洗。
 
*一般來說，清洗時間可選擇為過柱5-10個柱體積便可。在附吸成分其吸附力極強時，即使進行過清洗，柱性能也有可能得不到恢復。另外，請充分考慮淋洗液的pH值，以避免損壞色譜柱。