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  • 食品中著色劑的測定

    發布于 2011/06/24閱讀(1649)來源 zxj標簽 食品安全

    摘要

    食品中著色劑的測定

    內容


    一、目的與要求:

    1、明確測定各類色素的原理與方法。

    2、通過此實驗掌握紙層析定性法與提純色素的定量法。

    二、原理:

        聚酰胺是具有二極性的化合物,水溶性酸性染料在酸性條件下被聚酰胺吸附,而在堿性條件下解吸附,再用紙色譜法或薄層色譜法進行分離后與標準比較定性、定量。

        三、試劑:

        1、聚酰胺粉(尼龍6)

    2、硫酸1:1 0

    3、甲醇—甲酸溶液:6:4

    4、甲醇

    5、20%檸檬酸溶液

    6、10%鎢酸鈉溶液

        7、石油醚:沸程60-90℃

        8、海砂:先用l:10鹽酸煮沸15min,用水洗中性,再用5%氫氧化鈉溶液煮沸15min,再于105℃干燥,貯于具玻璃塞的瓶中,備用。

        9、乙醇-氨溶液:取1毫升氨水,加70%乙醇至100毫升。

    10、50% 乙醇溶液

    11、硅膠G。

    12、PH6的水:用20%檸檬酸調節至PH 6。

    13、鹽酸: 1:10

    14、5%氫氧鈉溶液

    15、碎瓷片:處理方法同海砂

    16、展開劑

        a、正丁醇-無水乙醇-1%氨水(6:2:3):供紙色譜用。

        b、正丁醇-吡啶-1%氨水(6:3:4):供紙色譜用。

        c、甲乙酮-丙酮-水(7:3:3):供紙色譜用。

        d、甲醇-乙二胺-氨水(10:3:2):供薄層色譜用。

        e、甲醇-氨水-乙醇(5:1:10):供薄層色譜用。

        f、2.5%檸檬酸鈉-氨水-乙醇(8:1:2)供薄層色譜用。

        17、色素標準溶液{以下商品作為標準以100%計。

        胭脂紅:純度60%;莧菜紅:純度60%;檸檬黃:純度60%;靛藍:純度40%;日落黃:純度60%,亮藍;純度60%。

        精密稱取上述色素各0.100克,用PH6的水溶解,移入100毫升容量瓶中并稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于1毫克商品色素。靛藍溶液需在暗處保存。

        18、色素標準使用液:用時吸取色素標準溶液各5.0毫升,分別置于50毫升容量瓶中,加PH6的水稀釋至刻度。此溶液每毫升相當于0.1毫克商品色素。

    四、儀器:

    1、分光光度計

    2、微量注射器或色素吸管

    3、展開槽,25 X 6 x 4cm

    4、層析缸

    5、濾紙、中速濾紙,紙色譜用

    6、薄層板:5 X 20em

        7、電吹風機

        8、水泵

        五、操作方法:

        1、樣品處理

        A、果味水、果子露、汽水:吸取50.0毫升樣品于100毫升燒杯中,汽水需加熱驅除二氧化碳。

        B、配制酒:吸取100.0毫升樣品于燒杯中,加碎瓷片數塊,加熱驅除乙醇。

        C、硬糖:蜜餞類,淀粉軟糖:稱取5.0或10.0克粉碎的樣品,加30毫升水,溫熱溶解,若樣液PH值較高,用20%檸檬酸溶液調至PH4左右。

        D、含蛋奶的樣品

        (1)奶糖:稱取10.0克粉碎均勻的樣品,加30毫升乙醇-氨溶液溶解,置水浴上濃縮至約20毫升,立即用1:10硫酸調溶液至微酸隆再加1.0毫升1:l0硫酸,加1毫升l0%鎢酸鈉溶液,使蛋白質沉淀,過濾,用少量水洗滌,收集濾液。

        (2)蛋糕類:稱取10.0克粉碎均勻的樣品,加海砂少許,混勻、用熱風風干樣品(用手摸已干燥即可以),加入30毫升石油醚攪拌,放置片刻,傾出石油醚,如此重復處理三次,以除去脂肪吹干后研細,全部轉人G3垂融漏斗或普通漏斗中,用乙醇—氨溶液提取色素,直至色素全部提完以下按(1)自“置水浴下濃縮至約20毫升”起依法操作。

        2、吸附分離

        將處理后所得的溶液加熱至70℃,加入0.5-1.0克聚酰胺粉充分攪拌,用20%檸檬酸溶液調PH至4,使色素完全被吸附,若溶液還有顏色,可以再加一些聚酰胺粉。將吸附色素的聚酰胺全部轉入G3垂融漏斗或玻璃漏斗中過濾(如用G3垂融漏斗過濾,可以用水泵慢慢地抽濾)。用20%檸檬酸酸化PH=4的70℃水反復洗滌,每次20毫升,邊洗邊攪拌,若含有天然色素再用甲醇-甲酸溶液洗滌1-3次,每次20毫升,至洗液無色為止。再用70℃水多次洗滌至流出的溶液為中性。洗滌過程中必須充分攪拌。然后用乙醇-氨溶液分次解吸全部色素,收集全部解吸液,于水浴上驅氨。如果為單色,則用水準確稀釋至50毫升,用分光光度法進行測定。如果為多種色素混合液,則進行紙色譜或薄層色譜法分離后測定,即將上述溶液置水浴上濃縮至約2毫升后移人5毫升容量瓶中,用50%乙醇洗滌容器,洗液并入容量瓶中并稀釋至刻度。

        3、定性

        A、紙色譜

        取色譜用紙,在距底邊2cm的起始線上分別點3-10微升樣品溶液,1-2微升色素標準溶液,掛于分別盛有a、b、c、d、e、f的展開劑的層析缸中,用上行法展開,待溶劑前沿展至15cm處,將濾紙取出于空氣中晾干,與標準斑比較定性。

        也可取0.5毫升樣液,在起始線上從左到右點成條狀,紙的右邊點色素標準溶液,依法展開,晾干后先定性后定量,靛藍在堿性條件下易褪色可用e展開劑。

        B、薄層色譜

        (1)薄層板的制備

        稱取1.6克聚胺粉,0.4克可溶性淀粉及2克硅膠G,置于合適的研缽中,加15毫升水研勻后,立即置涂布器中鋪成厚度為0.3mm的板。在室溫晾干后,于80℃干燥1小時置于燥器中備用。

    (2)點樣

        離板底邊2cm處將0.5毫升樣液從左到右點成與底邊平行的條狀的右邊點2微升色素標準溶液。

        (3)展開

        莧菜紅與胭脂紅用d展開劑,靛藍與亮藍用e展開劑,檸檬黃與其他色素用f展開劑。取適量展開劑倒入展開槽中,將薄層板放入展開,待色素明顯分開后取出,晾干,與標準斑比較,如比移值相同即為同一色素。

        4、定量

    A樣品測定   

    將紙色譜的條狀色斑剪下,用少量熱水洗滌數次,洗液移入10毫升比色管中,并加水稀釋至刻度,作比色法定用。   

        將薄層色譜的條狀色斑包括有擴散的部分,分別用刮刀刮下,移入漏斗中,用乙醇-氨溶液解吸色素,少量反復多次至解吸液無色,收集解吸液于蒸發皿中,于水浴上揮發除去氨,移入10毫升比色管中,加水至刻度作比色用。

      B、標準曲線制備

    分別吸取0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml胭脂紅,檸檬黃,日落黃色素標準使用液或0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml亮藍,靛藍色素標準溶液,分別置于10ml比色管中,各加水稀釋至刻度。

    上述樣品與標準管分別用1cm比色杯,以零管調節零點,于一定波長下(胭脂紅510nm,莧菜紅520nm,檸檬黃430nm,日落黃482nm,亮藍627nm),測定吸光度,分別繪制標準曲線比較或與標準色列目測比較。

    計算:

     X=(A*100)/(m*V2/V1*1000)

    式中:

    X:樣品中色素的含量,克/千克/升

    A:測定用樣液中色素的含量,毫克

    :m:樣品質量(體積),克(毫克)

    V1:樣品解吸后總體積,毫升

    V1:樣液點板(紙)體積,毫升

     

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