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    發布于 2011/06/23閱讀(2299)來源 zxj標簽 waters

    摘要

    waters 600e-2487 HPLC標準操作程序(SOP)

    內容

    waters 600e-2487 HPLC標準操作程序(SOP)

    1. 準備
    1.1. 使用前應根據待檢樣品的檢驗方法準備所需的流動相(應足夠;流動相必須用0.45μm濾膜過濾)、樣品和標準溶液(也可在平衡系統時配制),更換合適的色譜柱(柱進出口位置應與流動相流向一致)和定量環。
    1.2. 通電前應檢查儀器設備之間的電源線、數據線和輸液管道是否連接正常。

    2. 開機和泵操作
    2.1. 開機
    2.1.1. 接通UPS的電源,依次打開斷電保護器、脫氣機、600E泵、2487檢測器,待檢測器自檢結束顯示測量狀態時,打開打印機、電腦顯示器、主機。
    2.1.2. 打開Millennium32軟件,按「Login...」,輸入用戶名和密碼,按「OK」注冊進入系統主界面。在Project檔內選擇所需的項目,右擊『Run Samples』圖標,選擇色譜系統“600_2487”后打開QuickSet窗口。
    2.2. 更換溶劑
    2.2.1. 打開600E泵后,轉動進口集合管閥手柄(以下簡稱手柄)至RUN位置;
    2.2.2. 將一塑料燒杯放在參照閥出口管下以收集分流的溶劑,向右打開參照閥(斷開柱和進樣器);
    2.2.3. 按[Direct]鍵使其顯示直接控制屏幕,設流速為1ml/min(梯度配比閥在0ml/min時不工作);
    2.2.4. 選擇欲使用的某一溶劑通道,設其比例為100%,其它為0%;
    2.2.5. 將輸液管從原有溶劑瓶中取出,放入一干凈的空瓶中;
    2.2.6. 逆時鐘轉動手柄至DRAW位置,用啟動注射器從進口集合管閥的接口抽出約2ml溶劑;
    2.2.7. 再將輸液管放入新溶劑瓶內,繼續抽吸直到新溶劑出來并無氣泡為止;
    2.2.8. 轉動手柄至RUN位置,將啟動注射器取下并排掉筒內的溶劑。
    2.2.9. 重復5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即將使用的溶劑更換完畢。
    2.3. 排氣泡
    2.3.1. 打開參照閥,換流動相為100%超純水,設流速為10ml/min(注意:確認參照閥是打開的,否則可能損壞安裝好的柱);
    2.3.2. 轉動進口集合管閥手柄至DRAW位置,用啟動注射器抽出約10ml水;
    2.3.3. 順時鐘轉動手柄至INJ位置,緩慢用力使水通過泵頭從參照閥出口管排出(注意不要將氣泡注入泵中);
    2.3.4. 按[Stop flow]屏幕鍵停泵,關上參照閥。
    2.3.5. 如按以上方法不能排盡氣泡,從柱入口處拆下泵出口管,用塑料管連接至塑料燒杯中,設流速為10ml/min,沖洗2~5min(或更長時間)后停泵,重新接上柱。


    3.1.2. 檢查管路連接、柱接口及泵頭處是否漏液,如漏液應予以排除。
    3.1.3. 觀察泵控制屏幕上的壓力值,壓力波動應在平均值的5~10%以內。如超出此范圍,可初步判斷為柱前管路仍有氣泡,重復5.2.3.下的步驟。
    3.1.4. 壓力波動平穩后,換檢驗方法規定的流動相比例沖洗系統。在檢查基線穩定性前,讓最少5~6倍柱體積的流動相通過系統。
    3.1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method檔內選擇所需的儀器方法,按「Monitor」(此后泵由軟件控制),觀察基線和壓力變化。如果沖洗至基線漂移<10-3Au/min,噪聲為10-4Au數量級,且壓力平穩時,可認為系統已達到平衡狀態,可以進樣。
    3.1.6. 按「Abort」圖標(左上第五個),停止監視基線。
    3.2. 梯度模式
    3.2.1. 按檢驗方法規定的條件沖洗平衡系統,并注意壓力波動變化和排氣泡。
    3.2.2. 在進樣前運行1~2次空白梯度。

    4. 進樣
    4.1. 在QuickSet窗口內左下部選〈Single〉標簽,在Sample Name檔內填寫試樣名稱;在Function檔內選擇試樣類型(標準選“Inject Standards”;樣品選“Inject Samples”);在Method Set檔內選擇所需的方法組;在Injection Volume檔內輸入進樣體積;在Run Time檔內輸入記錄時間。
    4.2. 用針頭濾器過濾試樣溶液(注射液可不必過濾),用試樣溶液清洗注射器,并排除氣泡后抽取適量。
    4.2.1. 如按部分裝液法,用微量注射器定容進樣時,進樣量應不大于定量環體積的50%,并要求每次進樣體積準確、相同;
    4.2.2. 如按完全裝液法,用定量環定容進樣時,進樣量應不小于定量環體積的3倍(5~10倍準確性更佳)。
    4.3. 按〈Single〉標簽內右邊的進樣(Inject)按鈕,等待窗口底部狀態檔內顯示“Waiting”后,方可進樣。
    4.4. 將進樣閥手柄轉動至Load位置,將注射器針完全插入進樣閥入口中,平穩地注入試樣溶液,除另有規定外,讓注射器留在進樣閥上,將進樣閥手柄快速轉動至Inject位置,系統將自動運行,采集數據并記錄圖譜。
    4.5. 讓進樣閥手柄保持在Inject位置,到下次進樣前1~2min切換回Load位置,將注射器從進樣閥中拔出。
    4.6. 先用水再用試樣溶液清洗注射器后,按以上程序繼續進樣,直至完成。

    5. 數據處理(外標法)和打印
    5.1. 右擊系統主界面下的『Browse Project』圖標,選擇相應的項目,按「OK」進入Project窗口,選〈Channels〉標簽。
    5.2. 建立處理方法 選擇一個待積分的標準,右擊后選“Review”進入Review窗口。按「Processing Method Wizard」圖標(左邊第一個)進入New Processing Method向導窗口,按「OK」。
    5.2.1. 劃入一個感興趣的最窄的峰,按「Next>」;
    5.2.2. 劃入一段包含噪聲的基線,按「Next>」;
    5.2.3. 劃入一段要積分的區間,按「Next>」;
    5.2.4. 根據情況選擇最小峰面積和最小峰高,按「Next>」、「Next>」;
    5.2.5. 在Name檔內輸入各組分峰的名稱,按「Next>」、「Next>」;
    5.2.6. 在Method Name檔內填寫方法名稱,按「Finish」。退出Review窗口。
    5.3. 修改標準 選中所有標準,右擊后選“Alter Sample”進入Alter Sample窗口。
    5.3.1. 在Sample Type檔內將Unknown改成Standard;
    5.3.2. 按「Amount」圖標(左上第六個)進入Component Editor窗口;
    5.3.3. 按「Copy from Process Method」圖標(左上第五個),選擇剛建立的處理方法,按「Open」,在Value和Units檔內分別輸入標準所含各組分的數值和單位,完成后按「OK」回到Alter Sample窗口;
    5.3.4. 按「Save」圖標存盤,退出Alter Sample窗口。
    5.4. 積分 先選中所有標準,再選中所有未知樣品,右擊后選“Process”進入Background Processing & Reporting窗口,選Use specified processing methods,在右邊檔內選擇剛建立的處理方法,按「OK」。
    5.5. 打印 在Project窗口下選〈Results〉標簽。
    5.5.1. 選中要打印的標準/樣品,右擊后選“Preview”進入Open Report Method窗口,選合適的打印方法,按「OK」進入Report Publisher (Preview)窗口,預覽打印的結果。按打印(Print)圖標(左上第二個)即可打印結果。
    5.5.2. 按「Close」可進入Report Publisher窗口對報告方法進行修改,完成后按「Print」圖標(右數第二個)即可打印結果。
    5.6. 數據處理完成后,關閉所有窗口,在主界面下按「Logout」退出系統,關閉Millennium32軟件,再依次關閉電腦主機、顯示器、打印機。

    6. 清洗系統和關機
    6.1. 數據采集完畢后,關閉檢測器,繼續以工作流動相沖洗10min后,換水沖洗。
    6.2. 清洗進樣閥
    6.2.1. 用啟動注射器吸10ml超純水;
    6.2.2. 將注射針導入口沖洗頭(Rheodyne部件號7125-054)連接到注射器出口上(不要針),并將它們一起接到進樣口上;
    6.2.3. 使進樣閥保持在Inject位置,慢慢將水推入,水將通過注射針導入口、引導管、注射針導入管和注射針密封圈,由樣品溢出管排出。
    6.3. 清洗柱
    6.3.1. C18柱先用超純水以1ml/min沖洗40min以上,再用甲醇或乙腈沖洗20min。
    6.3.2. Protein PAK60柱先用超純水沖洗90min以上,再用甲醇或乙腈沖洗40min。
    6.4. 用水沖洗柱后,分別用20ml超純水沖洗柱塞桿外部和法蘭盤上小孔。
    6.5. 清洗完成后,先將流速降到0,再依次關閉泵、脫氣機、UPS,斷開電源。
    6.6. 填寫使用記錄。

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