食物中色氨酸的測定--熒光分光光度法
1.原理
食物中蛋白質在酸水解過程中，其色氨酸極易被分解，本法用堿水解蛋白質，直接測定色氨酸的天然熒光。在蛋白質水解液中，只有色氨酸和酪氨酸可以檢測到熒光。在pH為11時，色氨酸的熒光強度比酪氨酸大100倍，且兩種氨基酸的熒光峰相差40多nm，利用此特點，可在有大量酪氨酸的存在下，檢測色氨酸的含量。
2.適用范圍
參照中國預防醫學科學院營養與食品衛生研究所編寫的食物營養成分測定法第三版。適用于食物中色氨酸的測定。
3.儀器
3.1熒光分光光度計
3.2減壓蒸發器
3.3螺旋蓋大口瓶（瓶蓋要有橡皮墊）
3.4聚四氟乙烯管
3.5小玻璃球
3.6烘箱
4.試劑
（1）5mol/L NaOH：內含0.5%可溶性淀粉，臨用前配制。
（2）4mol/L 尿素（pH=11）
（3） 6mol/L鹽酸
（4） 溴百里酚藍指示劑：稱取0.1g溴百里酚藍加0.1mol/L氫氧化鈉1.6ml，配成0.05%水溶液。
（5） 高純氮（含量99.999%）
（6） 辛醇甲苯溶液：內含1%辛醇
（7） 色氨酸標準液：（1mg/ml）：稱取色氨酸標準，用0.005mol/L的氫氧化鈉溶液溶解，貯存于冰箱保存。
5.操作步驟
5.1稱取含粗蛋白質約5mg的食物樣品，置于聚四氟乙烯管中，加含可溶性淀粉的5mol/L氫氧化鈉1ml，加入1滴辛醇。
5.2將各管分別蓋上小玻璃球，放入1只帶螺旋蓋的大口玻璃瓶中，將瓶置于減壓蒸發裝置中，加冰和鹽降溫，減壓至真空度1.3Kpa10mmHg以下，繼續保持15min，充氮氣再減壓，如此反復3次，迅速旋緊大口瓶的螺旋蓋。
5.3將充氮氣的大口瓶置于烤箱內，在110℃水解樣品22小時。
5.4冷卻大口瓶，用重蒸餾水將樣品分別洗至25ml容量瓶中，（內含6N Hcl0.7ml）用溴百里酚藍為指示劑調pH至中性，用重蒸水定容至刻度。
5.5吸取樣品液1ml，于10ml帶蓋試管內，用pH11的4mol/L尿素溶液稀釋至刻度，在激發波長為280nm，發射波長為360mm下測定熒光強度，根據標準色氨酸的熒光強度曲線，計算樣品中色氨酸含量。
5.6色氨酸標準曲線：用前將標準貯備液稀釋成每ml含100，200，300，400μg的色氨酸標準系列。取每種濃度的標準液各1ml（雙份）與樣品管同樣加試劑，同時水解，以色氨酸標準濃度為橫坐標，熒光強度為縱坐標繪制標準曲線。
6.計算
每100g樣品中的色氨酸含量（mg）=
A×D×100
1000×W
式中
A：根據標準曲線得到的每ml測定液中色氨酸的含量（mg）
D： 稀釋倍數
W： 取樣量（克）